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    高盐沉淀蛋白质醇沉淀方法

    高盐沉淀蛋白质/醇沉淀方法同样也非常不错的,相比于PC抽提方法,该方法将PC抽提的所有缺点几乎克服了,除了可能会有较低的纯度的稳定性。蛋白质的去除能够更轻松、更快。纯度(蛋白质残留)不够稳定是其不足,能够用于大规模抽提是其所伴随的好处。在4℃蛋白质会有更好一些蛋白质的沉淀效率。


    6.jpg


    同类核酸的分离:

    DNA混合物的分离:

    常用磷酸钙、ECTEOLA-纤维素、DEAE-纤维素和甲基化白蛋白柱层析,逆流分溶,梯度离心等方法进行变性或降解的DNA和天然的分离。一个具有生物活性高度提纯的DNA制品应具有如下标准:

    1.RNA不含有

    2.水溶液具有高的粘度并有流动双折射作用,固体为纤维状.

    3.具有生物活性

    4.具有电泳超离心中单分散性和均一性

    5.多糖和蛋白质不含有

    6.可透析的小分子杂物不含有

    7.在pH7时,E(P)在6600左右,紫外吸收最大值在257~261μm之间


    RNA混合物的分离:

    有各类RNA和某些已降解的RNA混杂物包含在经过提取的初步纯化的RNA制品中,在进一步纯化时,柱层析、梯度离心及逆流分溶等方法通常被应用。例如使用tRNA与rRNA的分离用吸附于硅藻土表面的甲基化白蛋白柱吸附后,使用蔗糖梯度(顶部5%浓度,底部20%浓度)离心法分开或者通过不同梯度氯化钠溶液洗脱。mRNA有比较快的代谢速度,在哺乳动物中平均寿命约为几小时至十几小时。在细菌中平均寿命为90min。DNA-琼脂柱以及密度梯度离心法常常被使用来分离。在对rRNA制备时,因为共沉作用,常常有mRNA混入,为了使二者分开,通常能够使用萘-1,5-二磺酸处理。一般在磷酸缓冲液-甲酰胺-异丙醇系统下采用逆流分溶法进行各种tRNA的提纯,有着比较好的分离效果。


    2019-08-16 17:52:29 浏览次数:34次
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