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    丫丫湖南麻将:核酸纯化技术及蛋白质的去除

    湖南麻将有多少张牌 www.fbjwv.tw 核酸提取仪是应用配套的核酸提取试剂来使得样本核酸提取工作自动完成的仪器。其在、输血安全、法医学鉴定、疾病控制中心、临床疾病诊断、生物学研究等多种领域得到广泛地应用。


    核酸纯化技术

    密度梯度离心法:

    核酸的分离和分析也可以使用密度梯度离心法。双链DNA、单链DNA、RNA和蛋白质具有的密度不一样,所以能够通过密度梯度离心形式来使不同密度的纯样品区带形成。此方法对于制备大量核酸样本尤为适用。其中,若想要纯化大量质粒DNA,则首选氯化铯2溴化乙锭梯度平衡离心法。核酸密度梯度离心的标准介质为氯化铯。梯度液中的溴化乙锭与核酸结合,离心后形成的核酸区带经紫外灯照射,产生荧光而被检测,用注射针头穿刺回收后,通过或乙醇沉淀或透析将氯化铯除去,从而使纯化的核酸获得。


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    使用吸附介质的纯化技术:

    将裂解液过柱,吸附介质选择性吸附核酸,将残留的杂质洗涤去除以后,用水或者合适的低盐缓冲液从介质上洗脱下从介质上洗脱下,就能够直接在后续实验使用了。


    使用离子交换介质的纯化技术:

    将裂解液过柱,在离子交换介质上联接核酸,将残留的杂质洗涤去除以后,使用高盐缓冲液从介质上洗脱下核酸。再经过标准的乙醇/异丙醇沉淀、乙醇洗涤、干燥等操作,使纯的核酸获取到,最后将其在合适的缓冲液中溶解。


    蛋白质的除去

    因为在细胞内核酸通过核蛋白体形式存,核酸的提取无论采用哪种方法,在体系中,蛋白质均会有不同程度的存在,所以对于核酸分离纯化,除去蛋白质的步骤不可避免,有以下几种常用的方法:

    1.苯酚水溶液抽提,在对氨基水杨酸等阴离子化合物存在下,DNA或RNA均能够进入水相,蛋白质则在酚层沉淀,之后取水相将乙醇或2-乙氧基乙醇加入使得NA或DNA沉淀,可以使用葡聚糖凝胶G-10或G-25将残余的酚除去。


    2.摇荡抽提氯仿-戊醇或辛醇对提取液,在氯仿-水界面,蛋白质有凝胶形成,离心后除去,在水溶液留有核酸,在分离纯化中也常反复使用该方法。


    3.将去污剂如硫酸十二脂钠加入,此方法能够在从提取到分离纯化各阶段反复使用。将去污剂与氯仿法或苯酚法结合使用,会得到更加理想的效果。


    2019-08-16 17:45:29 浏览次数:139次
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