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    呱呱湖南麻将免费下载:经典核酸纯化技术以及多糖的去除方法

    湖南麻将有多少张牌 www.fbjwv.tw 核酸提取仪是应用配套的核酸提取试剂来使得样本核酸提取工作自动完成的仪器。其在、输血安全、法医学鉴定、疾病控制中心、临床疾病诊断、生物学研究等多种领域得到广泛地应用。


    经典核酸纯化技术

    细胞裂解后将含核酸的水相离心分离,并且将等体积的酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1体积)混合液加入其中。按照应用目的,两相通过简单颠倒混匀(适用于分离高分子量核酸)或者漩涡振荡混匀(适用于分离小分子量核酸)之后离心分离,核酸被留于上层水相,而疏水性的蛋白质被分配至有机相。酚是一种有机溶剂,为了防止未饱和的酚会吸收水相而将一部分核酸带走,因而需要预先用STE缓冲液将其饱和。酚也容易被氧化,而被氧化的酚会导致核酸链交联或者会使核酸链中磷酸二酯键断裂,所以在制备酚饱和液时需要将一特殊物质加入,从而避免酚被氧化。


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    氯仿能够将脂肪去除,使更多蛋白质变性,从而使提取效率提高。异戊醇则能够使操作过程中产生的气泡减少。一些有机溶剂能够将核酸盐沉淀,,通过沉淀能够使核酸浓缩,使核酸溶解缓冲液的种类发生改变和将某些杂质分子去除。在酚、氯仿抽提后用乙醇沉淀,将pH5.0~5.5,终浓度为0.3M的NaAc或KAc加入到含核酸的水相中之后,核酸磷酸骨架上的负电荷会被钠离子中和,在酸性环境中,会对核酸的疏水复性起促进作用,然后将2~2.5倍体积的乙醇加入,经一定时间的孵育,能够有效地使核酸沉淀就是典型的离子。核酸的沉淀也能够使用其他的一些有机溶剂(异丙醇、聚乙二醇(PEG)等)和盐类(10.0mol/L醋酸铵、8.0mol/L的氯化锂、氯化镁和低浓度的氯化锌等)。


    肝糖元、淀粉及粘多糖的去除

    因为肝糖元、淀粉及粘多糖与核酸有许多相似的物理化学性质,因此常?;嵩谌∫褐胁辛?。将它们去除的方法如下:

    1.在浓磷酸盐存在下,使用2-甲氧基乙醇对核酸提取液进行抽提,使核酸在上面有机层中,多糖溶于下层水相。

    2.DNA使用钙盐沉淀,再使用草酸钾处理,从而使DNA钾盐形成,回收,之后使用离子交换法对DNA进行吸附,分离其和多糖。

    3.取材前尽量使组织中多糖的含量减少。

    4.将淀粉酶加入,使大分子多糖分解为小分子,在以后纯化步骤中逐渐除去。


    2019-08-16 17:41:44 浏览次数:140次
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