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    PCR模板的简易裂解方法

    PCR模板的简易裂解方法为使用面很广的一类方法。此方法不需要纯化,将样品裂解后,就能够直接获取裂解液用于PCR。亦是由于不经过纯化,因此会出现比较高比例的假阴性。该方法最简单的就是反复冻融法,不需任何化学试剂,冻融离心,PCR检测就行,简便快捷。若使用该方法,那么水为最简单的裂解液,更加复杂一点的裂解液会含有一些可以使裂解效率提高,不会对后续的PCR反应抑制的物质。


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    SDS碱裂解法

    质粒抽提的裂首选SDS碱裂解法,该方法几乎不会受基因组DNA污染,高得率,速度快。该方法成功的关键是温和的操作以及裂解液/菌体的比例的控制。温度在4℃,蛋白质会有更好一些的沉淀效率,因此,在溶液中加入以后静置在4℃下一段时间以及在4℃下离心将蛋白质除去均能够使质量提高。此方法不一定要使用PC纯化,然而若和PC纯化结合使用,能够使获得的质粒的纯度非常高。将RNaseA(100ug/ml)加入到溶液中或者在最后的溶解液中将RNaseA(25ug/ml)加入来实现RNA的去除。总之,将RNaseA加入到溶液中会减少RNA的残留。不过,经典沉淀几乎没有办法将RNA残留彻底去除,除此以外,对大质粒(50kb以上),使用此方法可能会出现问题。


    含CTAB的裂解液方法

    如细菌、植物等富含多糖的样品的基因组DNA抽提首选含CTAB的裂解液的方法。此方法能否成功取决于洗涤的彻底程度和CTAB的质量这两个因素。CTAB的质量非常影响裂解效率。和其它的盐相比,洗涤去除CTAB要更加的难一些,并且酶活性会受到少量残留的CTAB的极大的影响。因此洗涤是否彻底也决定了该方法成功与否。多使用65摄氏度作为裂解时的温度。然而若发现得率太低或者降解严重,37-45这一相对比较低的温度范围也可以试一下。


    2019-08-16 17:38:13 浏览次数:189次
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