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    高浓度蛋白质变性剂裂解方法

    抽提RNA首选高浓度蛋白质变性剂(如GIT、GuHCl等)的裂解方法。细胞膜的快速裂解对于总RNA的抽提最为重要。而基因组与蛋白质“缠”住的问题和与基因组DNA相连接的蛋白质均不会影响以后的纯化,因而不必考虑。

    高浓度蛋白质变性剂可以将细胞膜快速地破坏,进而将细胞内的RNA酶迅速抑制住,使RNA的完整性得以确保。除了极少数样品主要是植物不适用于该方法,其它绝大部分样品均能够基于高浓度的蛋白质变性剂实现RNA的抽提。


    1.jpg


    有些样品如肌肉,尽管为RNA抽提,最好还是使用含蛋白酶的裂解液,因为去除这些样品中的蛋白质非常困难,最大得率和最高纯度的获得便是基于该方法。


    含蛋白酶的裂解方法

    抽提基因组DNA首选含蛋白酶的裂解方法。使与基因组DNA相连接的蛋白质游离以及使膜蛋白游离均为裂解。蛋白酶能够起到使蛋白质变小的作用,所以能够促进蛋白质的游离。大分子物质很容易被巨大的基因组DNA“缠”住。在蛋白酶的作用下,蛋白质变小,那么基因组DNA就不容易将其“缠”住。在纯化操作中,对蛋白质的去除有利,最终可以获取纯度更高基因组DNA。

    若基因组DNA与蛋白质“缠”在一起,那么当蛋白质的特性占优势,则纯化时以蛋白质的形式被去除,会损失DNA;当基因组DNA的特性占优势,则纯化时以DNA的形式被保留下来,会残留蛋白质。

    当然在细胞基因组DNA抽提方面,去污剂裂解方法仍然有优势,特别是要求操作简单和经济而不对得率和纯度有很高的要求的时候。

    此方法能否成功取决于裂解液/样品的比例的控制,此方法和高盐沉淀相结合,能够使操作变得最简单,然而和PC抽提相比,其纯度及得率的稳定性可能会差一些。


    2019-08-16 17:32:07 浏览次数:27次
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