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    常来湖南麻将俱乐部:高浓度蛋白质变性剂和含蛋白酶的裂解方法评价

    湖南麻将有多少张牌 www.fbjwv.tw 核酸提取仪是应用配套的核酸提取试剂来使得样本核酸提取工作自动完成的仪器。其在、输血安全、法医学鉴定、疾病控制中心、临床疾病诊断、生物学研究等多种领域得到广泛地应用。


    高浓度蛋白质变性剂裂解方法

    抽提RNA首选高浓度蛋白质变性剂(如GIT、GuHCl等)的裂解方法。细胞膜的快速裂解对于总RNA的抽提最为重要。而基因组与蛋白质“缠”住的问题和与基因组DNA相连接的蛋白质均不会影响以后的纯化,因而不必考虑。

    高浓度蛋白质变性剂可以将细胞膜快速地破坏,进而将细胞内的RNA酶迅速抑制住,使RNA的完整性得以确保。除了极少数样品主要是植物不适用于该方法,其它绝大部分样品均能够基于高浓度的蛋白质变性剂实现RNA的抽提。


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    有些样品如肌肉,尽管为RNA抽提,最好还是使用含蛋白酶的裂解液,因为去除这些样品中的蛋白质非常困难,最大得率和最高纯度的获得便是基于该方法。


    含蛋白酶的裂解方法

    抽提基因组DNA首选含蛋白酶的裂解方法。使与基因组DNA相连接的蛋白质游离以及使膜蛋白游离均为裂解。蛋白酶能够起到使蛋白质变小的作用,所以能够促进蛋白质的游离。大分子物质很容易被巨大的基因组DNA“缠”住。在蛋白酶的作用下,蛋白质变小,那么基因组DNA就不容易将其“缠”住。在纯化操作中,对蛋白质的去除有利,最终可以获取纯度更高基因组DNA。

    若基因组DNA与蛋白质“缠”在一起,那么当蛋白质的特性占优势,则纯化时以蛋白质的形式被去除,会损失DNA;当基因组DNA的特性占优势,则纯化时以DNA的形式被保留下来,会残留蛋白质。

    当然在细胞基因组DNA抽提方面,去污剂裂解方法仍然有优势,特别是要求操作简单和经济而不对得率和纯度有很高的要求的时候。

    此方法能否成功取决于裂解液/样品的比例的控制,此方法和高盐沉淀相结合,能够使操作变得最简单,然而和PC抽提相比,其纯度及得率的稳定性可能会差一些。


    2019-08-16 17:32:07 浏览次数:115次
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